Cuenca Rural

En el presente trabajo se presentanmos los resultados obtenidos a partir de en 252 envíos de muestras pertenecientes a 86 rebaños ovinos de la Comunidad Autónoma del País Vasco, en los que se habían detectado con problemas de abortos durante las 4 últimas parideras.

La toxoplasmosis, la fiebre transmitida por garrapatas y la enfermedad de Border fueron , son las causas de aborto más frecuentemente diagnosticadass en esta zona, seguidaos de los por el abortos enzoótico yel aborto paratífico, presentes en el 9% y 8% de los rebaños, respectivamente.

Entre los procesos esporádicos detectados conviene hay que destacar las infeccioónes por Listeria ivanovii, Yersinia pseudotuberculosis y la fiebre Q, entre otros. En el 65% de los rebaños se pudo confirmar la presencia de al menos un agente infeccioso como origen más probable de los abortos.

Palabras clave: Abortos ovinos. Técnicas de diagnóstico. Fetos. PCR.

Introducción

El problema de los abortos en las explotaciones ovinas tiene una gran importancia tanto desde un punto de vista económicao, por las pérdidas que conlleva, como así mismo supone unpor el riesgo que supone para la salud humana debido al por el carácter zoónotico de la mayor parte de los agentes procesos infecciosos que afectan al ganado ovino.

Dentro de estos, existen unos agentes poseen considerados de una mayor importancia debido a la su elevada difusión en los países productores de ovino, incidencia como el aborto paratífico, el aborto enzoótico, la brucelosis y la toxoplasmosis.

Otros procesos, podrían considerarse como menos habituales, destacando la enfermedad de border (Border disease), la fiebre transmitida por garrapatas (Anaplasma (Ehrlichia) phagocytophila), la fiebre Q (Coxiella burnetti), o las infecciones por agentes bacterianos como Campylobacter sp., Yersinia pseudotuberculosis, Listeria sp, o Leptospira sp. (Martin y Aitken, 2000). etc.

En este trabajo se presentan las causas de aborto más frecuentemente diagnosticadas en la Comunidad Autónoma Vasca (CAPV) tras a traves del el seguimiento de 86 rebaños de la Comunidad Autónoma Vasca (CAPV) con problemas de abortos a lo largo de las 4 últimas 4 parideras.

Materiales y métodos

Entre septiembre de 1998 y marzo de 2002 se recibieron en NEIKER muestras de 252 casos de abortos, procedentes de 86 rebaños ovinos de la CAPVComunidad Autónoma del País Vasco (CAPV). Las muestras recibidas consistieron en 206 fetos, 91 placentas, 460 hisopos vaginales, 817 sangres enteras y 1180 sueros.

A lo largo del periodo de este estudio, 35 de los ganaderos afectados remitieron muestras al laboratorio en tres o más ocasiones, 16 en dos, y 35 en una sola.

Las muestras fueron sometidas al protocolo laboratorial de NEIKER para el diagnóstico de abortos ovinos (García-Pérez y cols., 1998), ampliado recientemente con técnicas de PCR para la detección de ADN de Toxoplasma gondii en órganos fetales (Hurtado y cols, 2001), y de pestivirus (Vilcek y cols., 1994). Así mismo se utilizó la técnica de microaglutinación en placa para la detección de anticuerpos frente a los serovares bratislava y hardjo de Leptospira interrogans en sueros maternos (373) y en líquidos fetales (27).

Resultados y discusión

En el 65 % de los rebaños (56/86) se ha llegado a identificar al menos un agente de reconocida capacidad abortiva. El 35 % de las explotaciones no ha tenido un diagnóstico confirmado, hecho que se ha vistoy esto ha estado muy correlacionado con el número de envíos de muestras. En aAquellas que han enviado muestras una única vez (n=35), el porcentaje de diagnósticos confirmados ha sido del 40%.

En las que han realizado 2 envíos (n=16) el porcentaje de éxito ha sido del 56%, y por último en aquellas que han enviado 2 o más veces (n=35) el porcentaje de diagnóstico, se ha situado en conseguido el 83%de diagnósticos. Por lo tanto la insistencia en la recogida de muestras parece ser ha sido decisiva a la hora de poder alcanzarestablecer un diagnóstico.

Otro de los resultados más relevantes es el tipo de muestra que puede ofrecer más garantías de proporcionar un diagnóstico. Se ha observado cóomo la mayor parte de los diagnósticos obtenidos proceden del estudio de fetos y/o placentas (68%).

El valor de otro tipo de muestras es limitado, por ejemplo los hisopos vaginales tendrán mucho interés en algunos abortos de origen bacteriano siempre que las ovejas no estén tratadas con antibióticos y que las muestras estén bien tomadas, pero en nuestro estudio han contribuido en un 11% al diagnóstico de las causas de aborto.

Los resultados a partir de las muestras de sueros maternos han contribuido en un 21% de los diagnósticos efectuados, al evidenciar una seroconversión (elevaciones del titulo de anticuerpos) frente a clamidias, fiebre Q, Border disease o Toxoplasma en ovejas abortadas.

Las muestras de sangre entera con anticoagulante (EDTA) son decisivas para el diagnóstico de Fiebre por garrapatas (Anaplasma (Ehrlichia) phagocytophila), ya que la confirmación se realiza mediante la visualización de las mórulas de este agente en los neutrófilos de la sangre de las ovejas recientemente abortadas.

Cuando comienza un brote de abortos por causa desconocida, hay que realizar la recogida de muestras completa (hisopos, fetos, placentas, sueros pareados y sangres), insistiendo a los ganaderos en el valor de los fetos y placentas, ya que en nuestro estudio los envíos que no iban acompañados de fetos (n=94), un 78% se quedaron sin diagnóstico confirmado. Por el contrario, aquellos que sí que iban acompañados de fetos (n=158), el 55% no tuvo diagnóstico confirmado.

Causas de aborto más frecuentes en la CAPV

En la Tabla 1 se resumen los resultados de los diagnósticos obtenidos en 56 rebaños, en 13 de los cuales se ha detectado más de una causa de aborto. Toxoplasma aparece en 18 explotaciones (fetos con lesiones en 13 rebaños y evidencias de infección fetal en 5).

En segundo lugar el virus Border, en 15 rebaños (en 11 se observaron lesiones en fetos y/o nacimiento de corderos con sintomatología, y en 4 rebaños se observó seroconversión). La Fiebre por garrapatas (FTG) en tercer lugar, en 14 rebaños.

Las causas clásicas de aborto, como Chlamydia y Salmonella, han estado presentes en 7 y 6 rebaños respectivamente. Otros agentes que dan lugar a abortos de tipo más esporádico como Fiebre Q, Yersinia pseudotuberculosis, Listeria ivanovii, etc. han presentado prevalencias mínimas.

Tabla 1. Resultados de diagnósticos confirmados en el total de rebaños estudiados (n=86). (*) Infección fetal por Toxoplasma indica la presencia de anticuerpos en líquido fetal o detección de ADN en órganos del feto, pero sin ir acompañados de lesiones microscópicas compatibles.

En lo referente a Toxoplasma, el uso combinado de tres técnicas (examen histopatológico, serología fetal y PCR) ha permitido llegar a un diagnóstico confirmado o probable en el 21% de las explotaciones problemáticas, siendo la primera causa de aborto en la CAPV.

La ventaja de la PCR y la serología fetal frente a la histopatología es su capacidad de detectar la infección fetal por Toxoplasma incluso cuando el tejido está autolítico (Hurtado y cols., 2001). Sin embargo, únicamente hemos considerado como diagnósticos confirmados aquellos en los que el feto presentaba lesiones histológicas características e aborto por protozoo (focos de gliosis y de necrosis, acompañados o no por la presencia del parásito).

En todos los casos se ha confirmado por PCR que Toxoplasma gondii ha sido la causa del aborto. De momento no parece que Neospora caninum esté presente en las explotaciones ovinas en nuestra zona, a pesar de que en el ganado vacuno de la CAPV se sitúa como primera causa de aborto.

En lo que respecta a la enfermedad de Border(virus Border, BDV), se han observados fetos con lesiones y/o nacimiento de corderos con sintomatología característica de Border disease, y/o seroconversión en ovejas abortadas en el 17% de las explotaciones estudiadas.

Las lesiones histológicas asociadas a la infección por este virus BDV han consistido en una hipomielogénesis y la presencia de focos de gliosis en el encéfalo del feto.,y Een ocasiones se han ido acompañadoas decon resultados positivos en el ELISA para la detección de la presencia de antígeno de pestivirus en los fluidos fetales.

Complementariamente, se han procesado por RT-PCR todos los órganos de aquellos fetos que presentaban lesiones histológicas compatibles con la infección por el virus BDV pero no se ha obtenido amplificación a partir de en ninguno de los fetos, lo que podría deberse al distinto grado de autolisis que presentaban las muestras, que pudiera haber ocasionado la degradación del RNA viral.

No obstante, la técnica de RT-PCR ha permitido detectar la infección en a partir de muestras de sangre y órganos de mortinatos (encéfalo, bazo, pulmón, tiroides, etc), y de corderos con síntomas clínicos de la enfermedad, y deasí como en animales persistentemente infectados.

Esta técnica permite confirmar la identidad del agente, realizar el tipado genético y la secuenciación de las cepas, yasí como detectar la viremia en animales en los que la presencia de anticuerpos calostrales origina resultados falsos negativos en lasinterfiere en la interpretación de técnicas inmunológicas (Nettleton et al., 1998).

En laLa fiebre por garrapatas (Anaplasma phagocytophila) el aborto es una consecuencia del manejo de los animales jóvenes gestantes no inmunes que pastan en ganado en zonas dela sierra con abundantes garrapatas de la especie Ixodes ricinus.

En 6 rebaños ha sido el único agente detectado, y en 8 rebaños ha estado presente en combinación con otros agentes. De especial interés es la asociación de la Fiebre por garrapatas y la enfermedad de Border en varios rebaños. Ambos son agentes inmunosupresores, y su presencia en el rebaño podría favorecer que otros agentes patógenos circulantes en las explotaciones incrementen su patogenicidadefecto produciendo abortos.

Estas dos infecciones han estado frecuentemente asociadas al aislamiento en cultivos más o menos puros de otras bacterias secundarias: Arcanobacterium pyogenes, Staphylococcus aureus, E. coli, Serratia fonticola, Streptococcus canis, Pasteurella multocida, etc. que pueden ser indicadores de la presencia de un agente inmunosupresor en el rebaño. Son aspectos que merecerán más atención en futuros estudios.

Es de destacar el aislamiento de Listeria ivanovii en 3 rebaños, a partir de hisopos vaginales, placenta y/o órganos fetales.

Este agente produce abortos de manera esporádica (Martin y Aitken, 2000), pero el hecho de obtener el aislamiento a partir de los órganos fetales acompañado de la observación de lesiones en fetos (bronconeumonía catarral, y focos de necrosis en hígado) nos ha permitido confirmar la implicación de esta bacteria como causa de aborto. En 2 rebaños el aislamiento de L. ivanovii ha estado asociado a la seroconversión frente al virus Border.

Al igual que Listeria, Yersinia pseudotuberculosis es una bacteria muy ubicua que ha aislado en 2 brotes de abortos. Sólo en uno de los rebaños se observaron lesiones en los fetos, que consistieron en un punteado miliar de caracter difuso en pulmón e hígado.

Microscópicamente se observó neumonía purulenta, así como hepatitis purulenta. En ambos rebaños se detectó la presencia de antígeno de Border en los líquidos fetales, por lo que parece ser que la infección por pestivirus puede estar potenciado los efectos de bacterias habitualmente presentes en el medio, como Listeria ivanovii o Yersinia pseudotuberculosis.

Las proporciones de os diagnósticos de aborto enzoótico (Chlamydia sp.) y paratífico (Salmonella sp.) se han situado en una posición intermedia en lo que respecta a la frecuencia de aparición, y podría explicarse por la frecuente aplicación de antibióticos por parte de los ganaderos, y las vacunaciones realizadas periodicamente. El hecho de que la raza Latxa no tenga un sistema de producción intensiva puede ser también el motivo de que estos agentes no tengan tanta difusión e importancia como en otras comunidades autónomas.

No se ha diagnosticado ningún caso de aborto por Campylobacter sp., ni tampoco se han observado las lesiones características en órganos fetales, por lo que habiendo realizado un estudio tan intensivo en rebaños problemáticos podemos concluir que este agente no tiene relevancia, al menos aparentemente, en nuestra área.

En cuanto a la infección por Leptospira sp. se han analizado mediante la técnica de realizado microaglutinación, pero no se ha detectado ningún animal con título >1/30 frente a Leptospira hardjo.

Sin embargo el 10% (38/373) ha presentado títulos >1/100 para L. bratislava, pero estos resultados son difíciles de interpretar ya que son escasos los trabajos realizados en la especie ovina. Todos los líquidos fetales analizados han resultado negativos a ambos serovares. Los estudios realizados hasta la fecha son escasos en la especie ovina, por lo que el tema merece que se le dedique más atención en futuros estudios. 

Conclusiones

El porcentaje de diagnósticos fue más alto en aquellos rebaños en los que la recogida de muestras para su estudio laboratorial fue más intensa. El estudio completo de fetos y placentas mediante una combinación de técnicas microbiológicas, serológicas, histológicas y de biología molecular, es imprescindible para incrementar el éxito del diagnóstico laboratorial de estos procesos. 

Agradecimientos: Estudio financiado por el Departamento de Agricultura y Pesca del Gobierno Vasco.